Schiff氏试剂

王朝百科·作者佚名  2010-03-30  
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Schiff 试剂是由碱性品红和亚硫酸钠配制而成。可以和醛基反应形成紫红色的溶液。在生物实验可以和经过酸化的DNA 发生反应,DNA 被染成紫红色,而不和核仁,细胞质发生反应,因此可以来鉴定DNA的存在。

配制及保存方法:称取0.5g碱性品红加入到100ml煮沸的蒸馏水中(用三角瓶),时时振荡,继续煮5min(勿使之沸腾),充分溶解。然后冷却致50℃时用滤纸过滤,滤液中加入10ml1mol/LHCl,冷却致25℃时,加入0.5g偏重硫酸钠,充分振荡后,塞紧瓶塞,在室温暗处静置至少24h(有时需要2至3天),使其颜色退至淡黄,然后加入0.5g活性碳,用力振荡一分钟,最后用粗滤纸过滤于棕色瓶中,封瓶塞,外包黑纸。滤液应为无色也无沉淀,贮于4℃冰箱中备用。如有白色沉淀,就不能再使用,如颜色变红,可加入少许偏生亚硫酸钠或钾,使之再转变为无色时,仍可再用。

schiff试剂染色DNA时需在避光条件下进行。与shiff试剂反应的DNA,必须时被解离过的,因为显色原理是DNA中醛基与无色品红结合得到,而完整双链DNA也无醛基的,只有被水解后碱基与脱氧核糖之间的键打开,才会在脱氧核糖上形成游离醛基。

 
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