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过碘酸-锡夫反应

王朝百科·作者佚名  2010-04-06  
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过碘酸-锡夫反应,简称PAS(Periodic acidSchi)反应。其试剂能与多糖(淀粉、纤维素、半纤维、果胶)、中性粘多糖、糖蛋白、糖脂类以及不饱和脂类和磷脂等反应。 过碘酸是一种氧化剂,它可被乙二醇氧化为乙二醛,使1,2-二元醇类氧化,CC键断裂产生醛,并使醛不再进一步氧化,

反应如下: HO-CH2-CH2-OH+2HIO4→CHO-CHO+2HIO3+2H2O

乙二醇过碘酸乙二醛碘酸 RCHCHR′+HIO4→RCHO+R′CHO+HIO3+H2O 二元醇类醛类醛类产生的醛可与锡夫试剂结合产生红色复合物,反应所产生的颜色深度决定于1,2-二元醇类化合物量的多少。

锡夫试剂是由下列药品反应产生:

[器材与试剂] 器材:显微镜、载玻片、盖玻片、烧杯、培养皿、吸管、镊子、刀 片或切片机。

试剂:过碘酸溶液:0.5g过碘酸溶于100ml蒸馏水中,或者按下配制,过碘酸0.8g,95%乙醇70ml,醋酸钠0.27g,水20ml。

锡夫试剂: 称取0.25g碱性品红于50ml蒸馏水中,冷却后通入SO2,直到碱性品红颜色消失为止,然后用蒸馏水稀释250ml即成。或者按下制取:0.5g碱性品红加到100ml煮沸的蒸馏水中(用三角瓶盛),经常摇动,煮5分钟(勿使之沸腾),使之充分溶解,然后冷却至室温,加入0.5gNa2S2O5或K2S2O5或NaHSO3。塞紧瓶塞摇动,在室温下静置12天,使其颜色退至淡黄色,加入0.5g活性碳,用力振动2分钟,用粗滤纸过滤,得无色清液,装瓶密封,贮于4℃冰箱备用。 2%亚硫酸氢钠溶液。

[方法与步骤]

1.将待检材料做成切片,(脱腊过的石蜡切片,冰冻切片或徒手切片均可)。

2.将切片放入过碘酸溶液中,30℃下处理1小时左右。

3.吸去过碘酸溶液,用水或70%乙醇洗涤。

4.在锡夫试剂中染色15分钟左右(如室温过高则要在冰箱内进行,防止锡夫试剂中释放而使试剂失效)。

5.切片用2%亚硫酸钠液洗涤2次,再用流水冲洗5分钟,最后镜检,切片的紫红色处表示有多糖的存在。 注意事项 按上述操作,细胞中水溶性糖类已丧失,被染色的是不溶性的碳水化合物。

 
 
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