O-连接的的糖基化在糙面内质网或高尔基体中进行,由不同的糖基转移酶催化,每次加上一个单糖,通过丝氨酸苏氨酸等多肽相连,修饰糖一般只含有1-4个糖残基第一个糖残基为N-乙酰半乳糖胺。注意区分于N-连接糖基化。