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DHPLC

王朝百科·作者佚名  2010-04-19  
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变性高效液相色谱分析(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)

原理在部分变性的条件下,通过杂合与纯合二倍体在柱中保留时间的差异,发现DNA突变。异源双链DNA与同源双链DNA的解链特性不同,在部分变性条件下,异源双链因有错配区的存在而更易变性,在色谱柱中的保留时间短于同源双链,故先被洗脱下来,在色谱图中表现为双峰或多峰的洗脱曲线。

优点近年来建立并迅速发展的DHPLC是一种新型基因突变筛查技术,既能够自动化、高通量进行,且除PCR之外,勿需进行PCR引物修饰、购买特殊试剂、检测标记信号或作其它的样品处理。而目前已有的许多DNA突变分析技术诸如单链构象多态性 (single-strand conformation polymorphism,SSCP) 、变性梯度凝胶电泳法(denaturing gradient gel electrophoresis, DGGE)等均不能满足此要求。DHPLC具有高通量检测、自动化程度高、灵敏度和特异性较高、检测DNA片段和长度变动范围广、相对价廉等优点。与传统的SSCP 、DGGE等方法相比,DHPLC有较多的优点。SSCP的结果受血样质量、提取方法等因素的影响,并且需要跑胶、电泳;DGGE则需要标记引物,存在放射性污染,这两种方法都比较费时费力。而DHPLC则高度自动化,可以自动取样,检测每个样品只需要8分钟左右。DHPLC与其他检测DNA突变方法的最大不同在于,它能够纯化DNA片断。当然,只能检测杂合突变是DHPLC的不足之处,但是这可以利用混合的方法(即将纯合突变样品和野生型样品混合)来解决。

 
 
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