影印培养试验
影印培养(replica plating)试验--1952年,Lederberg夫妇 设计了一种更为 巧妙的影印培养法,直接证明了微生物的抗药性突变是自发产生,与相应的环境因素毫不相 关的论点。所谓影印培养法,实质上是使在一系列培养皿的相同位置上能出现相同菌落的一 种接种培养方法。其基本过程是:把长有许多菌落(可多达数百个)的母种培养皿倒置于包有 灭菌丝绒布的木圆柱(直径略小于培养皿)上,然后可把这一“印章”上的细菌一一接种到不 同的选择性培养基平板上,待培养后,对各皿相同位置上的菌落作对比后,就可选出适当的突 变型。据报道,用这种方法,可把母平板上10～20%的细菌转移到绒布上,并可利用它接种8 个子培养皿。因此,通过影印培养法,可以从在非选择性条件下生长的细菌群体中,分离出各 种类型的突变种。
-右图（http://www.foodmate.net/ddimg/uploadimg/20050518/193410788.jpg）就是利用影印培养技术证明大肠杆菌K12自发产生抗链霉素突变的实验。
大致方法是:首先把大量对链霉素敏感的大肠杆菌K12涂布在不含链霉素的平板(1)的表面,待 其长出密集的小菌落后,用影印法接种到不含链霉素的培养基平板(2)上,随即再影印到含有 链霉素的选择性培养基平板(3)上。影印的作用可保证这3个平板上所生长的菌落的亲缘和相 对位置保持严格的对应性。经培养后,在平板(3)上出现了个别抗链霉素的菌落。对培养皿(2 )和(3)进行比较,就可在平板(2)的相应位置上找到平板(3)上那几个抗性菌落的“孪生兄弟”。然后把平板(2)中最明显的一个部位上的菌落(实际上是许多菌落)挑至不含链霉素的培养 液(4)中,经培养后,再涂布在平板(5)上,并重复以上各步骤。上述同一过程几经重复后,只要涂上越来越少的原菌液至相当于平板(1)的培养皿(5)和(9)中,就可出现越来越多的抗性菌落,最后甚至可以得到完全纯的抗性菌群体。由此可知,原始的链霉素敏感菌株只通过(1)→ (2)→(4)→(5)→(6)→(8)→(9) →(10)→(12)的移种和选择序列,就可在根本未接触链霉素的情况下,筛选出大量的抗链霉素的菌株。[1]