MS培养基
MS培养基MS培养基是目前使用最普遍的培养基。其具有较高的无机盐浓度,能够保证组织生长所需的矿质营养还能加速愈伤组织的生长。由于配方中的离子浓度高,在配制、贮存和消毒等过程中,即使有些成分略有出入,也不会影响离子间的平衡。MS固体培养基可用于诱导愈伤组织,也可用于胚、茎段、茎尖及花药的培养,其液体培养基用于细胞悬浮培养时能获得明显的成功。MS培养基的无机养分的数量和比例比较合适,足以满足植物细胞在营养上和生理上的需要。因此,一般情况下,不用再添加氨基酸、酪蛋白水解物、酵母提取物及椰子汁等有机附加成分。和其它培养基的基本成分相比,MS培养基中的硝酸盐、钾和铵的含量高,这是它的显著特点。
MS培养基配方单单位mg/L
大量元素:NH4NO3 1 650
KNO31 900
CaCl2·2H2O 440
MgSO4·7H2O 370
KH2PO4 700
微量元素:KI 0.83
H3BO3 6.2
MnSO4·4H2O 22.3
ZnSO4·7H2O 8.6
Na2MnO4·2H2O 0.25
CuSO4·5H2O 0.025
CoCl2·6H2O 0.025
FeSO4·7H2O(27.8)+Na2-EDTA·2H2O(37.3)
有机成分:肌醇100
烟酸0.5
盐酸吡哆醇(维生素B6) 0.5
盐酸硫胺素(维生素B1) 0.1甘氨酸2
注意:肌醇一般是要另外分开来独自配成浓缩液,因为它比较难溶,一般配成100倍,而除去肌醇后的有机,还是可以配成1000倍的。
MS培养基配方表
成分
分子量
使用浓度 (mg/L)
大量元素
硝酸钾KNO3
101.11
1900
硝酸铵NH4NO3
80.04
1650
磷酸二氢钾KH2PO4
136.09
170
硫酸镁MgSO4.7H2O
246.47
370
氯化钙CaCl2.2H2O
147.02
440
微量元素
碘化钾KI
166.01
0.83
硼酸H3BO3
61.83
6.2
硫酸锰MnSO4.4H2O
223.01
22.3
硫酸锌ZnSO4.7 H2O
287.54
8.6
钼酸钠Na2MoO4.2 H2O
241.95
0.25
硫酸铜CuSO4.5 H2O
249.68
0.025
氯化钴CoCl2.62
237.93
0.025
铁盐
乙二胺四乙酸二钠Na2.EDTA
372.25
37.3
硫酸亚铁FeSO24.7H2O
278.03
27.8
有机成分
肌醇
100
甘氨酸
2
盐酸硫胺素VB1
0.1
盐酸吡哆醇VB6
0.5
烟酸VB5 或 VPP
0.5
蔗糖sucrose
342.31
30g /L
琼脂agar
7 g /L
注意事项:1.母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是:每种母液中的几种成分称量完毕后,分别用少量的蒸馏水彻底溶解,然后再将它们混溶,最后定容到1 L。
2.母液Ⅲ的配制方法是:将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分别放到450 mL蒸馏水中,边加热边不断搅拌使它们溶解,然后将两种溶液混合,并将pH调至5.5,最后定容到1 L,保存在棕色玻璃瓶中。
3.MS培养基中还需要加入2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、萘乙酸(NAA)、6 苄基嘌呤(6BA)等植物生长调节物质,并且分别配成母液(0 1 mg/mL)。其配制方法是:分别称取这3种物质各10 mg,将2,4-D和NAA用少量(1 mL)无水乙醇预溶,将6BA用少量(1 mL)的物质的量浓度为0.1 mol/L的NaOH溶液溶解,溶解过程需要水浴加热,最后分别定容至100 mL,即得质量浓度为0 1 mg/mL的母液。
4.组织培养是否能够获得成功,主要取决于对培养基的选择。不同的培养基具有不同的特点,也就适合于不同的植物种类和接种材料。在开展组织培养项目时,首先要对各种培养基进行了解和分析,以便能从中选择合适的使用。组培用的培养基一般包括基础培养基和激素,但是植物激素的种类和数量,随着不同培养阶段和不同材料有变化,因此各培养基配方中均不列入植物激素。常用的基础培养基除了有MS培养基,还有B5培养基,N6培养基。