这一类的限制酶来源各异，识别的靶字序列也不相同，但产生相同的粘性末端。由同尾酶产生的DNA片段，是能够通过其粘性末端之间的互补作用彼此连接起来的。 当把同尾酶切割的DNA片断连接后，原来的酶切位点讲不存在，不能被原来的限制酶所识别的切割。