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内毒素测定

王朝百科·作者佚名  2010-08-17  
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细菌内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁上的一种脂多糖(LipopolySaccharide,LPS)和蛋白的复合物,当细菌死亡或自溶后便会释放出内毒素。内毒素大量进入血液就会引起发热反应—“热原反应”。内毒素与多种感染疾病密切相关,病情恶化往往伴随着内毒素含量的增加,病情缓解也常伴随着内毒素含量的减少。因此,快速检测(1小时)血液、脏器内毒素含量可以为临床相关疾病的诊断预后提供参考。厦门鲎试剂厂微板鲎试仪Elx808(配套IU)(细菌内毒素分析仪)配合2005药典收录的光度法鲎试剂(动态浊度法鲎试剂、显色基质鲎试剂、动态显色法鲎试剂),可快速定量检测各种样品中的内毒素浓度,对于临床内毒素血症早期诊断、合理用药及药品检测具有重要价值。

内毒素测定方法有:

凝胶法

动态浊度法

终点浊度法

动态显色法

终点显色法

凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来定性检测或半定量内毒素的方法。凝胶法鲎试剂常见规格为0.1ml/支或0.5ml/支或者更大装量,使用时应加除热原水(细菌内毒素检查用水)复溶后使用。凝胶法是通过观察有无凝胶形成作为反应的终点。此法操作比较简单,经济,不需要专用测定设备,可以进行定性或半定量测定。

动态浊度法、终点浊度法、动态显色法、终点显色法,这四种方法都是定量检测内毒素的。

根据检测原理,终点浊度法和动态浊度法都属于浊度法。浊度法系利用检测鲎试剂与内毒素反应过程中的浊度变化而测定内毒素含量的方法。终点浊度法未见商品化产品。动态浊度法(又称动态比浊法)是检测反应混合物的浊度上升某一预先设定的吸光度所需要的反应时间,或是检测浊度增加速度的方法。

终点显色法和动态显色法都是属于显色基质法。显色基质法系利用鲎试剂与内毒素反应过程中产生的凝固酶使特定底物显色释放出的呈色团的多少而测定内毒素含量的方法,根据产物颜色判断内毒素浓度,又称为比色法。厦门鲎试剂厂于2005年推出以鲎四肽为显色底物的鲎试剂盒,抗干扰能力强, 灵敏度高达0.005EU/ml, 质量达到国际领先水平。目前已有500多家单位使用该试剂盒,并有部分单位发表相应文献。国内有少量国外产品,但价格远高于国产试剂,到货周期长。

如果您仅需要检测样品的内毒素限量,可以选择凝胶法鲎试剂,通过确定内毒素限值及最大有效稀释倍数,做样品的干扰试验从而确定使用的鲎试剂的灵敏度。

如果您需要定量测定样品中内毒素含量则应选择显色基质鲎试剂盒或动态浊度法鲎试剂。

动态浊度法与动态显色法需要带温育系统的动态光度测定仪器及配套软件,例如,微板鲎试仪ELx808及软件TALgent 或Gen5。动态浊度法与动态显色法简单方便、一步即成,线性范围宽。

终点显色法需要配套酶标仪或可见分光光度计进行检测。配套带有温育系统的酶标仪,如微板鲎试仪ELx808,可减少试剂用量。

 
 
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