Folin-酚试剂
folin-酚试剂一般用于folin酚法,做蛋白质含量测定的一种显色剂。
folin-酚试剂一般原理:folin试剂中的磷钼酸-磷钨酸盐被蛋白质中的苯丙氨酸(Phe)和酪氨酸(Tyr)残基还原,发生显色反应:产生蓝色(钨兰+钼兰)。蓝色的浓重度与蛋白质含量成正比。
配置:
试剂甲:
(A) 10克 Na2CO3,2克 NaOH和0.25克酒石酸钾钠 (KNaC4H4O6·4H2O)。溶解于500毫升蒸馏水中。
(B) 0.5克硫酸铜(CuSO4·5H2O)溶解于100毫升蒸馏水中,每次使用前,将50份(A)与1份(B)混合,即为试剂甲。
(2)试剂乙:
在2升磨口回流瓶中,加入100克钨酸钠(Na2WO4·2H2O),25克钼酸钠(Na2MoO4·2H2O)及700毫升蒸馏水,再加50毫升85%磷酸,100毫升浓盐酸,充分混合,接上回流管,以小火回流10小时,回流结束时,加入150克 硫 酸 锂(Li2SO4),50毫升蒸馏水及数滴液体溴,开口继续沸腾15分钟,以便驱除过量的溴。冷却后溶液呈黄色(如仍呈绿色,须再重复滴加液体溴的步骤)。稀释至1升,过滤,滤液置于棕色试剂瓶中保存。使用时用标准NaOH滴定,酚酞作指示剂,然后适当稀释,约加水1倍,使最终的酸浓度为1N左右。
注意:选用无水碳酸钠。A,B三种溶液在测定的当天将按100:1:1的体积比混合。
混合放置30mn.后使用,混合液只能用一天。三种溶液分开可长期保存。