凝胶柱层层析

概述凝胶层析又称凝胶过滤，是一种按分子量大小分离物质的层析方法。该方法是把样品加到充满着凝胶颗粒的层析柱中，然后用缓冲液洗脱。大分子不能进入凝胶颗粒中的静止相中，只留在凝胶颗粒之间的流动相中，因此以较快的速度首先流出层析柱，而小分子则能自由出入凝胶颗粒中，并很快在流动相和静止相之间形成动态平衡，因此就要花费较长的时间流经柱床，从而使不同大小的分子得以分离。

分类商品凝胶的钟类很多，常用的有葡聚糖凝胶（Sephadex G）以及羟丙基葡聚糖凝胶(Sephadex LH-20)。

（1）葡聚糖凝胶：有平均分子量一定的葡聚糖及交联剂（如环氧氯丙烷）交联聚合而成。生成的凝胶颗粒网孔大小取决于所用交联剂的数量及反应条件。加入的交联剂数量越多即交联度越高，网孔越紧密，孔径越小，吸水膨胀也越小；交联度低，则网孔越稀疏，吸水后膨胀也越大。商品型号即按交联度大小分类，并以吸水量多少表示。以Sephadex G-25为例，G为凝胶，后附数字=吸水量*10，故G-25表示该葡聚糖凝胶吸水量为2.5ml/g。此型号凝胶只适用于在水中应用，且不同规格适合分离不同分子量的物质。

（2）羟丙基葡聚糖凝胶：为Sephadex G-25经羟丙基化处理后得到的产物。与葡聚糖凝胶相比，虽然羟基的数目没有改变，但碳原子所占比例相对增加，因此此类型凝胶不仅可在水中应用，也可在极性有机溶剂或它们与水组成的混合溶剂中膨润使用。此类型除保留有葡聚糖凝胶的分子筛特性，可按分子量大小分离物质外，在由极性与非极性溶剂组成的混合溶剂中还可起到反相分配色谱的作用。

羟丙基葡聚糖凝胶可再生，暂时不用时可用水洗、含水醇洗、醇洗，最后泡在醇中贮于磨口瓶中备用。

此外，商品凝胶还有丙烯酰胺凝胶、琼脂糖凝胶以及结合了不同离子交换基团的葡聚糖凝胶衍生物。