樱桃卷叶病毒
基本信息学名: Cherry leaf roll virus
异名: Elm mosaic virus ,Golden elderberry virus
英文名: Cherry leaf roll virus 缩写:CLRV
分类地位:豇豆花叶病毒科(Comoviridae),线虫传多面体病毒属
分布:欧洲和北美;土耳其;前苏联;新西兰。
形态特征:病毒质粒等轴对称,直径约30毫微米,发生在欧洲和北美。病毒易经汁液传播,寄主范围广。在有几种寄主植物中,病毒经种子和花粉传播,也有经线虫传播的报道。
危害情况:樱桃卷叶,兰筛扑(Sambucus racemosa)环斑,西洋接骨木(S.nigra)黄网,榆树花叶,黑刺莓矮缩,叶片出现纹斑和死亡(P.J.Ormerod,私人通信)。病毒常发生在某些大黄品种上,但是未试验它对大黄的作用。
寄主植物自然感染樱桃、大黄、接骨木、美洲榆、美洲山茱萸(H.E.Wat一erworth&R·Lawson,私人通信)和黑刺莓。Schmelzer(1966)把一种接骨木分离株接种于23科双子叶的 61种植物和一种单子叶植物Commelina coelestris。 Hansen和 stace一Smith报道,其它接骨木分离株侵染55种草木植物中的44种植物。
诊断寄主
觅色黎和茴藜(Chenopodium amaranticolor 和C.quioa), 初级的褪绿和坏死斑;系统斑驳、畸变和坏死。
黄瓜(Cucumis sativus),子叶出现初级褪绿斑。冬季在温室内培育的植株,真叶发生畸变和斑驳,植株矮缩和过早死亡;夏季出现褪绿环和纹,不太影响生长。
烟草(Nicotiana tabacum)White Budey品种,感染2~3天后出现初级的坏死斑点;在一定条件下形成密集的坏死环。系统的坏死和褪绿的环和纹斑;后来长出的叶片无症状。
黄花烟(N. rustica),初级的褪绿和坏死的斑点和环;系统坏死和褪绿环。
菜豆(Phaseolus vulgaris)的The Prince品种。初期叶片上出现初级的坏死斑;棕色斑点和环;真叶叶脉坏死;冬季顶芽死亡。
繁殖寄主
烟草或(至少樱桃分离株)欧洲甜樱桃(Prunus avium)是适于繁殖病毒的寄主; 烟草和茴黎对于繁殖病毒以用于纯化来说是有效的。
测定寄主
烟草 White Burley品种是有效的初级病斑寄主。
生物学株系:
樱桃和草本植物的分离株的毒力是不同的。下列毒株在血清学上(见亲缘关系)和其它方面都不同:
Cropley(1961)的典型(樱桃)毒株
Tomlinson和 Walkey(1967)的大黄毒株。
Varney和 Moore(1952)的榆树花叶毒株。
Hansen(1967)及 Hansen和 Stace-Smith的金黄浆果接骨木毒株。
血清学
通常抗血清效价较低,在1/64和1/640之间。凝胶双扩散试验产生一条沉淀带。春季,可用粗制的樱桃汁液作凝胶扩散试验(Cropley ,19 6 0)
亲缘关系
植物交叉保护和血清学试验中,樱桃卷叶病毒和南芥花叶病毒、番茄黑环病毒、黑悬钩子环斑病毒、番茄环斑病毒或烟草环斑病毒之间未发现亲缘关系 (Cropley,1961)。榆树花叶病毒和番茄环斑病毒之间的单向保护,使 Varney和 Moors(1952)猜测这两病毒之间存在亲缘关系,但血清学试验(Flulton & Fulton,1970)不能证实这一点。Jones和 Murant证明,榆树花叶病毒是樱桃卷叶病毒的一个毒株;他们发现,从樱桃、大黄、榆树(=榆树花叶病毒)和浆果接骨木(=金黄浆果接骨木病毒)分离的樱桃卷叶病毒的分离株,在血清学上既有关而又有差异。英格兰和荷兰的樱桃分离株在血清学上与苏格兰和北美的浆果接骨木分离株相同。Stefanac(1969)发现,南斯拉夫的浆果接骨本分离株在血清学上也与樱桃和大黄分离株有区别。
汁液稳定性
烟草汁液中,病毒的樱桃和浆果接骨木分离株稀释到10-3和10-4后,在52~55℃下,10分钟内就失去侵染性,在 20℃下,5~10天才失去侵染性(CroPley,1961;Hansen&Stace-smith)。在烟草上作试验,樱桃芽汁液的侵染性比烟草汁液的强(Cropley,1964)。
纯化
下列方法是有效的(Tomlinson&Walkey,1967)。在冷的 pH7.5的0.1M磷酸钾缓冲液中,把接种10天后的烟叶匀浆,每克组织使用1.5毫升缓冲液。用细纱布压榨匀浆,冷冻 2~3周。融化后加 0.25倍体积的氯仿。搅拌5分钟后低速离心。再高速离心使液相澄清,沉淀在PH7.5的0.05M磷酸缓冲液中悬浮2小时,再低速离心。在上清液中加入1.0倍体积的 50%饱和硫酸铵,在20℃下放1小时。低速离心使沉淀沉降,再把沉淀悬浮在PH7.5的0.05M磷酸缓冲液中。低速离心,取出清晰的具侵染性的上清液。所有步骤是在 3 ℃下进行。制剂侵染性达10-3。
Hansen和 Stace-Smith用类似的方法纯化金黄浆果接骨木毒株。Stace-Smith(1966)纯化番茄环斑病毒的方法也可用于纯化浆果接骨木毒株(A.T.Jones,私人通信), 但榆树花叶病毒似乎较难纯化,即使用这一方法也不行(Fulton & Fulton,1970)。
质粒特性
金黄浆果接骨木毒株的纯化制剂沉降成两个组分:T和B,每一组分都含侵染性的核蛋白质粒(Hansen&Stace-Smith)。高度稀释时的沉降系数(S20,w)(Svedberge):114(T),182(B)。260/280比值:1.77(T),1.78(B)。
质粒结构
质粒为等轴对称,直径约30毫微米,外形有角。
质粒组成
核酸为RNA; 蛋白质分子量约54,000(A·T·Jones&M·A·MayO,私人通信)。
病毒与细胞和组织的关系
顶端分生组织、很尖、花粉、胚珠和成熟种子的电镜观察,发现内含体由装有单排质粒的微管组成,但是感染大黄分离株的心叶烟的叶组织中,未发现这种结构(Walkey&Webb,1970)。然而,通过茎尖分生组织的培养,可以从大黄中去除这种病毒(Walkey,FitzPatrick&Woolfitt,1969)。
传播途径介体传播 :
据报道,樱桃分离株经线虫Xiphinema coxi,X.diversicaudatum 和X.vuitiemezi传播(Fritzche & Kegler,1964;Flegg,1969)。榆树花叶毒株不经线虫 X.Americ-anum传播(Fulton & Fulton,1970).
种子传播:
草木寄主中,种子传毒,苗的感染率从0.6%g至100%(Schmelzer,1966;
Lister&Murant,1967;Tomlinson&walkey,1967 ; Hansen&Stace-Smith,正出版)。榆树花叶毒株在控制授粉实验中,经花粉和胚珠传至种子,但不传至亲本植株(Callahan,1957a,b)。
菟丝子传播 :
加利福尼亚菟丝子(Cuscuta calitonica)、草地菟丝子(C.campestris)或 C.subinclusa不传毒(Schmelzer,1966)。
检疫与防治由于CLRV在作物上引起的症状不是诊断性的,可能是由几种生物的或非生物的因素引起,而且,很多植物种类是被隐性侵染,因此,对这病毒的检测依靠如下方法:对草本指示植物进行生物学测定和血清学测定。
(一) 指示植物的生物学测定
CLRV很容易通过机械传播,但对木本植物似乎受到很大程度的限制。用机械接种方法接种草本植物,CLRV通常导致以下症状:
1、 苋色藜和茴藜(Chenopodium amaranticolor和C.quinoa),在接种7天内出现局部的退绿和坏死;7天后出现系统斑驳、畸形和坏死。
2、 黄瓜(Cucumis sativus) 在接种7天内,局部出现的退绿和坏死常发展到子叶,继而是系统坏斑。
3、 黄花烟(Nicotiana rustica )和烟草(N.tabacum)White Burley品种 在接种5天内,出现局部坏死,常有坏死环斑;依赖于生长条件,在老叶上大部分分离物导致系统性退绿或坏死环和线纹。伸长的新叶片无症状,但含有病毒。
(二) 血清学测定
CLRV的症状好象是由几种病毒引起的,因此CLRV的鉴别必须通过具有特异性的血清学测定。CLRV有很大的抗血清范围,不同病毒株系的抗血清在被利用着。对不同CLRV株系的抗血清是有用的,而且已成功地被应用在自然寄主的ELISA检测上。利用化学发光和底物变色,核酸探针也被用于检测此病毒。免疫捕捉RT-PCR也用于检测此病毒。
【注】樱桃病树矮小,往往发病后几年就死亡。樱桃的症状类似于由Pseudomonas mor-prunorum或真菌病原物所引起的树枝开裂的症状。虽然报道线虫传毒,但是并未证明这是田间传播的主要方式。草本植物的试验中,樱桃卷叶病毒所引起的症状类似于许多蠕传多角病毒所引起的症状,唯有血清学试验才能鉴别。