大规模表达序列标签

表达序列标签技术（EST，Expressed Sequence Tags）EST技术直接起源于人类基因组计划。但是，由于人类基因数量巨大，以及真核基因特有的复杂性（如内含子、外显子的区别、重复序列等），使得一次性不加选择地对基因组全长进行测序成为几乎不可能完成的工作。Venter等在1991年提出了表达序列标签（EST）技术。1原理

此技术以大规模cDNA测序为基础，即提取生物体的mRNA，进一步获得cDNA文库，挑选其中300—500bp的部分（即EST序列）进行序列测定，然后通过生物信息学手段得到全长的基因序列。通常EST序列位于一段cDNA的3’—端非翻译区，也可以在该cDNA中随机选取。利用EST技术克隆基因及功能分析，使克隆和定位新基因的策略发生了巨大变革。2实验流程

构建cDNA文库

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DNA测序

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信息处理和管理

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①②③

去除载体序列、宿主序列和 聚类分析、拼接 数据库查询

重复序列

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生物信息学分析

3特点

EST 自身的局限性集中体现在序列分析中的精确程度，另外还有由高丰度与低丰度序列之间的巨大差异造成的重复测定与漏测。4应用

EST的应用范围很广，但大多以测序为该技术应用的核心。一般用来进行基于EST序列的基因克隆与基因表达分析。基因组学的研究从结构基因组学过渡到功能基因组学，利用结构基因组学的同存数据，充分发挥EST技术的优势，将为大规模进行基因识别、克隆和表达分析提供空前的动力，为功能基因组的研究提供广阔的空间。而在植物领域中，无论是模式植物拟南芥，还是以水稻为代表的农作物，其EST测序及分析正处于研究阶段