变性沉淀法
概念当蛋白质受到外界因[1]素作用时，蛋白质分子结构从有规则的排列变成不规则排列，其物理性质也发生改变，并失去原有的生理活性，即蛋白质发生变性，变性蛋白质在水中的溶解度较小且以沉淀的形式从溶液中析出。利用蛋白质的变性作用，除去混合液中杂蛋白的方法，称为变性沉淀法。
方法加热利用蛋白质等生物大分子对热的稳定性不同，加热破坏某些组分，而保存另一些组分，如脱氧核糖核酸酶对热的稳定性较核糖核酸酶差，加热处理可使混杂在核糖核酸酶中的脱氧核糖核酸酶变性而沉淀；又如以黑曲霉发酵制备脂肪酶时，常混杂有大量淀粉酶，当把混合酶在40℃水中保温2．5h(pH＝3．4)时，则90％以上的淀粉酶受热变性而沉淀。加热处理的方法只适用于对热较稳定的目的药物成分，如灰黄霉素(可加热至80～90℃)、抗敌素(又称多黏菌素E)(可加热至90℃左右)等。加热不仅可使蛋白质变性凝固，还可改变流体的流动特性，利于固液分离，但要严格控制加热温度和时间。加热变性沉淀法的优点在于操作简便、原材料消耗较低，但是，若直接通人蒸汽加热，产生的冷凝水可使混合液体积增大，而且不能用于热敏性药物(如青霉素)的预处理。加入化学试剂金属盐、表面活性剂、某些有机酸、酚、卤代烷等可使混合液中的蛋白质或部分蛋白质发生变性而沉淀，使之与目的产物分离，如制取核酸时用氯仿将蛋白质沉淀分离。调节pH值当溶液的酸碱性发生剧烈变化时，可引起蛋白质的变性而沉淀，如用浓度为2．5％的三氯乙酸处理含胰蛋白酶、抑肽酶或细胞色素C的溶液，均可除去大量杂蛋白，而对所提取的酶活性没有影响。也可先用酸调pH值后，再用碱调，或在较宽的pH值范围内酸碱变性结合使用，效果更为显著。