离子凝聚
目的探讨低离子凝聚胺酶联免疫(EIA)快速二步法检测HBsAg方法的可行性。方法：在检测试验的第一步反应步骤中加入低离子凝聚胺溶液，设计新的反应条件，对HBsAg进行检测，并将测定结果与常规二步法和按照试剂盒提供的一步法的测定结果作比较。结果：快速二步法的测定结果与常规二步法的结果相一致，检出率为100%，最低检测量为1ng/mL，SD值为0.12，CV值8.6%。一步法的阳性符合率则为99.2%，且存在钩状效应。结论：新建立的低离子凝聚胺快速二步法检测乙肝标志物检出率高，重复性好，符合卫生部对检测低值量的要求，且操作快速简便，值得推广应用。
乙肝表面抗原的检测方法有多种，如酶联免疫测定法(EIA)一步法、二步法、RIA法、电化学发光免疫测定法(ECLIA)等，目前医疗卫生单位检测乙肝标志物基本上应用EIA一步法进行定性测定，但该方法影响因素多，结果有时不准确。现在越来越多的人主张使用EIA二步法，但常规二步法最大的缺点是检测反应时间长达2h，给日常检验工作带来不便和病人等候时间长而少被应用。本研究是在EIA二步法中加入低离子凝聚胺溶液，旨在缩短反应时间，现将方法及结果报道如下：
材料方法1、材料
1.1HBsAg质控血清购自卫生部临床检验中心，批号：200403。
1.2EIAHBsAg试剂盒购自上海科华公司。
1.3低离子介质凝聚胺溶液凝聚胺0.5g、葡萄糖50g、Na2?EDTA0.2g、NaCl8g、KCl2.9g、KH2PO40.2g、Na2HPO4·2H2O2.9g、蒸馏水1000mL4℃保存。
1.4冼涤液枸椽酸三钠0.588g加入试剂盒提供的PBS浓液,用蒸馏水稀释至200mL。
1.5其他设备伯乐550酶标仪、振荡器、冼板机、水浴箱。
1.2方法(1)试剂盒放置室温平衡，每孔加入标本量50μL，每孔加入低离子介质凝聚胺溶液50μL，室温（25℃左右）振荡5min，洗板4次。(2)每孔加入酶标液2滴，振荡2min，置37℃5min，取出冼板5次。(3)每孔加入显色剂A液、B液各1滴，充分混匀，封板。置37℃15min，每孔加终止液1滴，混匀，用酶标仪读数，波长450nm，10min内完成。
结果最低检测量以样品吸光度值Cut/Off值（S/CO值）≥1判定为阳性，各质控品S/CO值见表1。表1可见,本方法最低检测量1ng/mL,符合卫生部有关最低检测量的要求。
讨论凝聚胺介质溶液广泛用于血库交叉配血和血型鉴定，近来有报道用于肥达氏试验等方面抗原抗体测定，我们尝试用于乙型肝炎表面抗原测定，取得快速、特异的良好效果。血清学实验是抗原与抗体结合形成复合物的反应过程，凝聚胺是低离子聚合物，在水溶液中带强大的正电荷，能使抗原抗体之间的引力增加，距离缩短，增加有效碰撞，同时可解除抗原抗体复合物周围的电荷和水化膜，促进抗原抗体复合物的形成，极大地加速反应速度，缩短了结合反应时间。凝聚胺低离子介质聚合物可以形成非特异性抗原抗体反应，但我们在洗液PBS中加柠檬酸钠配成的洗液进行洗涤，可以消除这种现象，360份阳性标本测定结果与常规二步法测定结果比较完全一致。反应过程中，除低离子介质凝聚胺溶液外，电解质对抗原抗体完全结合亦相当重要，所以我们在试剂配制中加入了电解质和缓冲对物质。此外，充分振荡对增加抗原抗体之间的有效碰撞，加速抗原抗体复合物形成亦非常关键。
目前较多认为EIA二步法是测定乙肝表面抗原准确可靠的方法，陶洪群［4］比较了ECLIA法和EIA一步法、二步法检测HBsAg结果，认为ECLIA法灵敏度高，自动化程度高，省时；EIA一步法受钩状效应影响明显，漏检率高；EIA二步法能较好避免钩状效应，敏感度高，漏检率低，但费时。单桂秋等［5］对EIA一步法和二步法进行了分析，也认为EIA二步法结果可以消除一步法的前带钩状效应。虽然ECLIA一步法检测HBsAg优越，但设备试剂昂贵，收费高，加重病人的负担，一直来未能在医院特别是广大的基层医院广泛应用。而EIA一步法由于无需贵重仪器设备，且试剂价格便宜，操作简便快速被广泛应用于临床诊断，但其结果的准确性受到一定程度的影响；EIA二步法检测结果的准确可靠性已被公认，但其检测反应的时间长，不能充分满足临床和患者的需求而较少地推广使用。我们研究的低离子介质凝聚胺快速EIA二步法，反应过程仅需10min，经与常规EIA二步法对360份HbsAg阳性结果进行测定比较，结果与常规EIA二步法检测结果符合率一致，未见有前带和钩状效应的影响，消除了常规EIA二步法反应时间过长的因素，整个试验无需特殊设备，试剂配制简单，操作简便，易于掌握，特异性强，最低检测量符合卫生部的要求，值得推广应用。