PEG融合法

PEG有不同聚合度产物，其相对分子质量分别有1000/2000/4000/6000/12000及20000等，相对分子质量为1000~6000的PEG均可用作促融剂。PEG的作用机理尚不清楚，有人认为，PEG可以使原生质体的膜电位降低，然后，原生质通过钙离子交联促进凝聚。另外，由于PEG的脱水作用，扰乱了分散在原生质膜表面的蛋白质和脂质的排列，提高了脂质颗粒的流动性，从而促进原生质体融合。PEG还可能导致细胞脱水凝聚二收缩变形，使邻近细胞大面积紧密接触，使该部分的膜间蛋白颗粒发生转移和凝聚，邻近的纸质分子发生相互作用，由于钙离子等强烈的促进脂质分子的扰动和重新组合，使接触处的小区域发生融合，形成小的细胞质桥，并不断扩大而导致两个细胞融合。PEG对细胞有一定的毒性作用，相对分子质量越大，毒性越强，在使用前应测试PEG对细胞毒性作用及使用条件，包括使用时PEG的实际浓度、作用时间及反应温度等主要因素。在植物原生质体融合中，习惯用高钙、高pH溶液，他能获得较高的融合频率。