蛋白质等电点

概念由于蛋白质表面离子化侧链的存在,蛋白质带净电荷。由于这些侧链都是可以滴定的(titratable),对于每个蛋白都存在一个pH使它的表面净电荷为零即等电点。
英文缩写pI
特性蛋白质在溶液中有两性电离现象。假设某一溶液中含有一种蛋白质。当pI=pH时该蛋白质极性基团解离的正负离子数相等,净电荷为0,此时的该溶液的是pH值是该蛋白质的pI值。某一蛋白质的pI大小是特定的,与该蛋白质结构有关,而与环境pH无关。
在某一pH溶液中当pH>pI时该蛋白质带负电荷。反之pH<pI时该蛋白质带正电荷。pH=pI时该蛋白质不带电荷
人体内pH=7.4;而体内大部分蛋白质的 pI<6; 所以人体内大部分蛋白质带负电荷。
主要应用在等电点时,蛋白质分子以双极离子存在,总净电荷为零,颗粒无电荷间的排斥作用,易凝集成大颗粒,因而最不稳定,溶解度最小,易沉淀析出。
在等电点外的所有其他pH值,依据蛋白质所带净电荷采用电泳和离子交换层析来分离和分离纯化该蛋白质。
测定方法●方法:平板等电聚焦
●原理:蛋白质分子在含有载体两性电介质形成的连续而稳定的线性pH梯度中进行电泳。但不自是按照等电点不同被分离。
●仪器:Bio-Rad Model 111Mini IEF Cell
●样品要求:
●液体:浓度>3mg/ml;体积>200ul;固体:质量>200ug
●样品纯度>90%;含盐量<3 0mM;分子量:一般要求大于1000Da
●常见影响测试情况:
1、蛋白质纯度不足
2、含盐量过高
3、蛋白质分子量太小,导致无法固定染色
常见蛋白质等电点参考值蛋白质 等电点
鲑精蛋白[salmine] 12.1
鲱精蛋白[clupeine] 12.1
鲟精蛋白[sturline] 11.71
胸腺组蛋白[thymohistone] 10.8
珠蛋白(人)[globin(human)] 7.5
卵白蛋白[ovalbuin] 4.71-4.59
伴清蛋白[conal bumin] 6.8-7.1
血清白蛋白[serum albumin] 4.7-4.9
肌清蛋白[myoal bumin] 3.5
肌浆蛋白[myogen A] 6.3
β-乳球蛋白[β-lactoglobulin] 5.1-5.3
卵黄蛋白[livetin] 4.8-5.0
γ1—球蛋白(人)[γ1-globulin(human)] 5.8,6.6,7.3,8.2
γ2—球蛋白(人)[γ2-globulin(human)] 5.2-5.5
肌球蛋白A[myosin A] 5.1
原肌球蛋白[myosin A] 5.9
铁传递蛋白[siderophilin] 3.4-3.5
胎球蛋白[fetuin] 5.5-5.8
血纤蛋白原[fibrinogen] 4.8
α-眼晶体蛋白[α-crystallin] 6.0
β-眼晶体蛋白[β-crystallin] 5.1
花生球蛋白[arachin] 3.9
伴花生球蛋白[conarrachin] 3.7-5.0
角蛋白类[keratins] 4.6-4.7
还原角蛋白[keratein] 6.5-6.8
胶原蛋白[collagen] 4.8-5.2
鱼胶 4.7-5.0
白明胶[gelatin] 4.0-4.1
α-酷蛋白[α-casein] 4.5
β-酷蛋白[β-casein] 5.8-6.0
γ-酷蛋白[γ-casein] 3.83-4.41
α-卵清粘蛋白[α-ovomucoid] 1.8-2.7
α1-粘蛋白[α1-mucoprotein] 5.5
卵黄类粘蛋白[vitellomucoid] 3.2-3.3
尿促性腺激素 11.0-11.2
溶菌酶[lyso zyme] 6.99
肌红蛋白[myoglobin] 7.07
血红蛋白(人)[hemoglobin(human)] 7.23
血红蛋白(鸡)[hemoglobin(hen)] 6.92
血红蛋白(马)[hemoglobin(horse)] 4.6-6.4
血蓝蛋白[hemerythrin] 5.6
蚯蚓血红蛋白[chlorocruorin] 4.3-4.5
血绿蛋白[chlorocruorin] 4.6-6.2
无脊椎血红蛋白[erythrocruorins] 9.8-10.1
细胞色素C[cytochrome C] 4.47-4.57
视紫质[rhodopsin] 5.2
促凝血酶原激酶[thromboplastin] 5.5
α1-脂蛋白[α1-lipoprotein] 5.4
β1-脂蛋白[β1-lipoprotein] 5.9
β-卵黄脂磷蛋白[β-lipovitellin] 3.75
芜菁黄花病毒[turnip yellow vvirus] 5.3
牛痘病毒[vaccinia virus] 6.85
生长激素[somatotropin] 5.73
催乳激素[prolactin] 5.35
胰岛素 1.0
胃蛋白酶[pepsin] 8.1
糜蛋白酶(胰凝乳蛋白酶[chymotrypsin] 4.9
牛血清白蛋白 7.8
核糖核酸酶(牛胰)[ribonuclease或Rnase(bovine pancreas)]4.58
甲状腺球蛋白[thyroglobulin] 4