铜盐络合法
吡啶硫酮锌（zinc pyrithione，简称ZPT），是2-吡啶硫醇-1-氧（2-pyridinethiol-1-oxide）的锌络合物，作为去头屑剂广泛用于洗发、护发化妆品中。我国化妆品卫生标准GB7916-87规定ZPT仅用于用后能清洗掉的产品中，其含量不得超过0.5%。因此建立快速特异性的ZPT测定方法十分必要。本法采用柱前衍生法，预先将ZPT与铜盐作用，生成铜络合物。此络合物比较稳定，可用HPLC分离测定，得到ZPT含量。
1 应用范围
本法适用于测定洗发、护发类化妆品中的吡啶硫酮锌。
2 原理
本法采用柱前衍生的HPLC。吡啶硫酮锌与Cu2+作用生成吡啶硫酮铜络合物（Cu2+ complex of pyrithione），再经HPLC分离（1），紫外检测器检测。根据标准品的保留时间定性，峰面积定量。
3 试剂
3.1吡啶硫酮锌标准溶液：精确称取0.1000g吡啶硫酮锌标准品，用水饱和的氯仿定容至100ml。此液含ZPT 1.0mg／m1。
3.2 吡啶硫醇-1-氧（2－pyridinethiol –l-oxide简称PT）：分析纯。
3.3 五水硫酸铜（copper （II）sulphate pentahydrate〕：分析纯。
3.4 柠檬酸：优级纯。
3.5 磷酸氢二钠：优级纯。
3.6 乙二胺四乙酸二钠（EDTA）：优级纯。
3.7 氯仿：分析纯。
3.8 甲醇：优级纯。
3.9 缓冲液（pH5.0）：0.1mo1／L柠檬酸与0.2mo1／L磷酸氢二钠混合（97＋103）。
4 仪器
4.1高效液相色谱仪。
4.2超声浴器。
4.3离心机。
5 分析步骤
5.1 样品预处理
精确称取含10mg ZPT的样品于100ml容量瓶中，用氯仿饱和的缓冲液（pH5.0）稀释至刻度(2)。充分振荡几分钟后，置于超声浴器上超声几分钟(3)，取此溶液10.0ml加入10.0ml水饱和氯仿、2.0ml lmo1／L硫酸铜溶液，充分振荡5min后，1500r/min离心5min。取下层溶液为HPLC待测试液备用。
5.2 色谱条件
色谱柱： Nucleosil 5C18（150mm×4.6mm ID，5μm）。
检测器：紫外检测器，检测波长320nm。
流动相3：2的甲醇-水(1)。
流动相流速：1.0m1／min。
柱温：25℃。
积分仪： 7000B型（System Instruments，Tokyo，Japan）。
5.3标准曲线
分别取ZPT标准溶液（3.1）0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml于离心管中，用水饱和的氯仿稀释至10.0ml，得浓度分别为0、0.02、0.04、0.06、0，08、0.10mg／m1的标准系。各管分别加入10.0ml氯仿饱和的缓冲液（pH 5.0），2.0m1 1mo1／L硫酸铜溶液(4)。混合物按样品处理方法振荡、离心、分离。取5μl下层溶液用HPLC进行分析(5)。记录其保留时间、峰面积。浓度与峰面积作图可得标准曲线。
5.4测定
取（5.1）制备的样液5μl，注入高效液相色谱仪。根据标准品的保留时间（5.3）定性。记录其峰面积,并从标准曲线上查出对应的ZPT浓度。
6 计算
按下式计算ZPT含量（%）：
c =A×100/（m×1000）×100%
式中：c――样品中ZPT的含量，%；
m――样品质量，g；
A――从标准曲线上查出的ZPT浓度，mg/ml。
7 方法的准确度和精密度
样品加标回收实验，5次测定结果，回收率在98.0～100.6%,相对标准偏差为0.8～2.0%。在0.1～0.5μgZPT范围内线性良好。
注解：
（1）为消除金属离子的干扰，在进行色谱分析前，色谱系统可用0.1%EDTA以0.5ml/min流速预冲洗,其后用水冲洗干净。
（2）用氯仿饱和的缓冲液（pH5.0）稀释样品，若导致固态物质析出，可改用氯仿饱和的水稀释样品。
（3）ZPT不溶于洗发液或其它化妆品中，但能在这些化妆品中均匀分散；ZPT不溶解于水，而溶于1mol/L的HCl或NH3-NH4Cl缓冲液（pH11.0）。在1mol/L的HCl中ZPT不稳定。溶解后立即降解10%；24小时后，降解25%；室温下置于避光器中保存4天，降解93%。ZPT能稳定存在于NH3-NH4Cl（pH11.0）中，然而，在此溶液中加入硫酸铜溶液，产生深蓝色盐络合物。由于此盐络合物的存在，降低了有机相对ZPT的铜络合物的萃取效率。因此本法采用pH=5.0的缓冲溶液或水稀释样品，超声处理水样品液，均匀性良好，5次测定标准偏差为1.4%。