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全基因合成

王朝百科·作者佚名  2010-01-13  
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在解释权基因合成前,先了解一下什么是“基因”

下面收录了对"基因"的五个定义,实为异曲同工.

1,基因是存在于细胞内有自体繁殖能力的遗传单位.

2,基因是一个具有遗传功能的特定核苷酸序列的DNA片段.

3,编码一个RNA或一条多肽链的DNA片段称为一个基因.

4,基因是生物体遗传的基本单位,存在于细胞的染色体上,作直线排列.

5,基因是生物体内一切具有自主复制能力的最小遗传功能单位,其物质基础是一条以直线排列.具有特定核苷酸序列的核酸片段.由众多基因构成了染色体.每个基因大体在1000-1500bp的范围,相对分子质量约为670000.

DNA是十分庞大的生物分子。病毒含有几千到几十万个核苷酸,原核生物的DNA分子平均为10E6个碱基对,真核生物的DNA分子可达l0E9个碱基对。按每个基因平均为1000个碱基对进行粗略的计算,大肠杆菌约有3000-4000个基因,而人类细胞的基因数目可高达200万个。虽然其中某些基因,特别是真核细胞内的一些基因是多拷贝的,在基因组内有多个甚至极多个重复,实际基因数要比上述推算的基因数要少得多。尽管如此,原核细胞和真核细胞基因组内的基因数目仍然是极为惊人的。

由于研究某些基因或者某种蛋白的生理作用,例如生理活性等,因此,需要通过人工实验的方法合成一段全基因序列。

经过基因工程学工作者艰苦细致的探索研究,人们现在已经掌握了分离和制造目的基因的一些有效方法。一般来说,目前获取目的基因的方法主要有三种:反向转录法、从细胞基因组直接分离法和人工化学合成法,这些方法都有一个前提,就是已有文献报道所研究的目的基因的蛋白序列或者基因的序列。

1)反向转录法:这种方法主要用于分子量较大而又不知其序列的基因,它以目的基因的mRNA为模板,设计上下游引物,借助反转录酶合成碱基互补的DNA片段,即cDNA,再在DNA聚合酶的作用下合成双链cDNA,亦即目的基因的双链DNA。

2)基因组扩增法:利用基因组抽提试剂盒,可以从细胞、植物、血液、动物组织中直接分离基因组,设计特异扩增的引物,利用抽提的基因组为模版,直接PCR扩增,以获取目的基因。

3)人工合成:依照某一蛋白质的氨基酸序列,或基因序列,设计全长引物,利用OVERLAP方法形成模版DNA,再利用PCR扩增的方法得到双链DNA,然后将PCR产物转化克隆至克隆载体或者表达载体中。化学合成全基因目前是准确率最高,速度最快的方法,同时可以依据密码子在不同宿主细胞的偏爱性和不同的实验需求,设计基因序列,提高表达水平。

 
 
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