柱色谱
柱色谱法
附录Ⅴ C. 柱色谱法
色谱法，又称层析法.是一种以分配平衡为机理的分配方法.色谱体系包含两个相,一个是固定相,一个是流动相.当两相相对运动时,反复多次的利用混合物中所含各组分分配平衡性质的差异,最后达到彼此分离的目的。
色谱法从发明到现在已有八十多年的历史.它是纯化和分离有机或无机物的一种方法.
色谱法按固定相的状态可分为柱色谱.平板色谱和棒色谱三种而实验室中最常用的是柱层析和薄层层析,以及它们之间的配合应用。
1.吸附柱色谱
吸附色谱的原理：在一定条件下,硅胶与被分离物质之间产生作用,这种作用主要是物理和化学作用两种.物理作用来自于硅胶表表面与溶质分子之间的范德华力.化学作用主要是硅胶表面的硅羟基与待分离物质之间的氢键作用。
色谱管为内径均匀、下端缩口的硬质玻璃管,下端用棉花或玻璃纤维塞住,管内装入
吸附剂。吸附剂的颗粒应尽可能保持大小均匀,以保证良好的分离效果。除另有规定外,
通常多采用直径为0.07～0.15mm的颗粒。色谱柱的大小,吸附剂的品种和用量,以及洗脱
时的流速，均按各品种项下的规定。
(1) 吸附剂的填装 ①干法 将吸附剂一次加入色谱柱，振动管壁使其均匀下沉，
然后沿管壁缓缓加入洗脱剂；或在色谱柱下端出口处连接活塞，加入适量的洗脱剂，旋
开活塞使洗脱剂缓缓滴出，然后自管顶缓缓加入吸附剂，使其均匀地润湿下沉，在管内
形成松紧适度的吸附层。操作过程中应保持有充分的洗脱剂留在吸附层的上面。
②湿法 将吸附剂与洗脱剂混合，搅拌除去空气泡，徐徐倾入色谱柱中，然后加入
洗脱剂将附着管壁的吸附剂洗下，使色谱柱面平整。
俟填装吸附剂所用洗脱剂从色谱柱自然流下，液面和柱表面相平时，即加供试品溶
液。
(2) 供试品的加入 除另有规定外，将供试品溶于开始洗脱时使用的洗脱剂中，再
沿色谱管壁缓缓加入，注意勿使吸附剂翻起。或将供试品溶于适当的溶剂中，与少量吸
附剂混匀，再使溶剂挥发去尽使呈松散状，加在已制备好的色谱柱上面。如供试品在常
用溶剂中不溶，可将供试品与适量的吸附剂在乳钵中研磨混匀后加入。
(3) 洗脱 除另有规定外，通常按洗脱剂洗脱能力大小递增变换洗脱剂的品种和比
例，分别分部收集流出液，至流出液中所含成分显著减少或不再含有时，再改变洗脱剂
的品种和比例。操作过程中应保持有充分的洗脱剂留在吸附层的上面。
2.分配柱色谱
方法和吸附柱色谱基本一致。装柱前，先将载体和固定液混合，然后分次移入色谱
柱中并用带有平面的玻棒压紧；供试品可溶于固定液，混以少量载体，加在预制好的色
谱柱上端。
洗脱剂需先加固定液混合使之饱和，以避免洗脱过程中两相分配的改变。