star活性
Star活性限制酶在一些特定条件下使用时，对于底物DNA的特异性可能降低。即可以把与原来识别的特定的DNA序列不同的碱基序列切断，这个现象叫Star活性。Star活性出现的频率，根据酶、底物DNA、反应条件的不同而不同。
导致Star活性出现的因素包括：低粒子强度、高pH值以及过高的甘油浓度(> 5% v/v）。尤其是最后一点，因为一般限制酶生产商提供的缓冲液（buffer）都含有较高的甘油浓度（典型为50% v/v），如果稀释不充分就有可能导致Star活性的出现。当有一个以上酶切位点时，该问题显得更加突出。