单细胞凝胶电泳技术

试剂及材料1）PBS

2）0.8%正常熔点凝胶（PBS配制）

3）0.6％低熔点凝胶（PBS配制）

4）毛玻璃片

5）盖玻片

6）碱性裂解液（2.5mol/L NaCl;100mmol/L Na2EDTA;10mmol/L Tris;1%肌氨酸钠），临用前加10％DNMSO，1％Triton X-100

7）电泳缓冲液（1mmol/L Na2EDTA;300mmol/L NaOH；Tris.Cl，pH7.5）

8）EB（2ug/ml）

步骤1.制备第一层胶：100ml 0.8％正常熔点胶，加盖盖玻片，4℃固化10min；

2.制备第二层胶：轻轻地去除盖玻片，在第一层胶上滴加75ul含1×10000个细胞的0.6％低熔点胶（cell与凝胶比例为1：5），加盖盖玻片，4℃固化10min；

3.裂解：去掉盖玻片，将凝胶浸入冰冷的碱性裂解液内（临用前加10％ DMAO，1％Triton X-100），4℃裂解1h；

4.取出玻片，用PBS缓冲液漂洗3次后置于水平电泳槽内，加入pH13的电泳缓冲液（没过玻片2-3min），放置20min（黑闭）。

5.电泳：电压20V，300mA，30min

6.取出玻片，用PBS或Tris.Cl，pH7.5漂洗3次，每次3min；

7.染色：胶上滴加3ulEB，加盖盖玻片，24h检测。或者4℃，潮湿，闭光的条件下保有胶片，观察时再染色，镜检。