原位末端凋亡法
TUN EL 技术, 即脱氧核苷酸末端转移酶( Term inal2deoxynucleo t idyl t ran sferase, TdT )介导的x2dU TP 缺口末端标记(TdT 2m ediatedx2dU TP n ick end labeling, TUN EL ) 技术, 是目前原位检测细胞凋亡最敏感、快速、特异的新方法, 已广泛用于生物、医学研究领域。
TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling (TUNEL)是一种用来检测细胞凋亡(apoptosis)的分析方法.细胞凋亡有一项重要的特征为细胞内的DNA会碎裂成片段(DNA fragmentation),TUNEL可以有效的去探测DNA片段的产生,所以可以传达细胞凋亡的讯息.TdT为terminal deoxynucleotidyl transferase,此种酵素可以在没有DNA模板的情形下,连结核甘酸到DNA的3'-OH处.1992年,以色列科学家Gavrieli等人将TdT引为为标定DNA片段的一个酵素,自此衍生出TUNEL此项技术.TUNEL的好处是可以在细胞凋亡发生的早期,即可侦测到DNA片段的产生,并且可以直接使用在组织切片上,观察细胞凋亡发生的位置.所以TUNEL目前为广泛接受与使用的一种细胞凋亡的分析方法.
细胞凋亡的研究方法有形态学方法、DNA电泳、末端标记技术凋亡细胞膜改变分析、细胞凋亡酶学分析和流式细胞仪分析方法（flow cytometry, FCM）等。以往对细胞凋亡的研究常常采用形态学方法进行研究，如光学显微镜和电子显微镜来观察，以出现凋亡小体即判断为凋亡细胞。但这种现象出现晚，对凋亡细胞亦难以做出精确的定量分析。DNA聚合酶I、Klenow酶介导的原位末端标记技术和TdT酶介导的生物素化dUTP缺口末端标记技术(terminal oxynucleotidyl transferase mediated dUTP biotin nick end labeling, TUNEL )是近年来发展出现的细胞凋亡原位检测技术。细胞凋亡的特征是内源性核酸内切酶被激活，细胞自身的染色质或DNA被切割，出现单链或双链缺口，并产生与DNA断裂点数目相同的3′-OH末端。原位末端标记技术可以检测到形态改变之前的凋亡细胞，敏感性高，特异性强，为凋亡细胞计数提供了基础