Semi-quantitation RT-PCR

王朝百科·作者佚名  2010-09-17  
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半定量反转录-聚合酶链反应(semi-quantitative reverse transcription and polymerase Chain reaction ,SqRT-PCR)是近年来常用的一种简捷、特异的定量RNA测定方法,通过mRNA反转录成cDNA,再进行PCR扩增,并测定PCR产物的数量,可以推测样品中特异mRNA的相对数量。以半定量RT-PCR为基础建立起来的mRNA含量测定技术,较含内标化的RT-PCR定量测定的mRNA的方法更为简便可行。

测定体内目的基因的表达增加减少与否,即通过目的基因跑出来的电泳带与管家基因(如β-actin)的电泳带的相对含量比较,观测目的基因表达增减,另外还要做一个β-actin的内参照对照。管家蛋白(House Keeper)基因即细胞内一些表达比较稳定的基因,如β-actin在各种细胞内的含量都稳定在10%左右。因此研究的目的基因的表达量与这些比较恒定含量的基因进行比较,就可以观察到目的基因是否随着时间而改变。

 
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