福林试剂
科技名词定义中文名称:福林试剂英文名称:Folin reagent定义:一种能与酚羟基呈色的磷钼酸-磷钨酸试剂。可与蛋白质分子中酪氨酸残基作用生成深蓝色化合物。在劳里法蛋白质定量中也使用该试剂。应用学科:生物化学与分子生物学(一级学科);方法与技术(二级学科)以上内容由全国科学技术名词审定委员会审定公布
目录
一、原理二、福林试剂的配制三、测定方法
一、原理蛋白质或多肽分子中有带酚基酪氨酸或色氨酸,在碱性条件下,可使酚试剂中的磷钼酸化合物还原成蓝色(生成钼蓝和钨蓝化合物)。蓝色的深浅与蛋白质的含量成正比, 可用比色法测定。
二、福林试剂的配制于2000ml磨口回流装置内加入钨酸钠(Na2WO4·2H2O)100g,钼酸钠(NaMoO4·2H2O)25g。水700ml,85%的磷酸50ml,浓盐酸100ml,文火回流10h,加入硫酸锂(Li2SO4)150g,蒸馏水50ml,混匀取去冷凝器,加入几滴液体溴,再蒸沸15min,以驱逐残溴及除去颜色,溶液应呈黄色。若溶液有绿色,需再加数滴液溴,再蒸沸除去,冷却后定容至1000ml,过滤,置于棕色瓶中保存,此溶液使用时加2倍蒸馏水稀释。
三、测定方法将1ml标准蛋白溶液和5ml0.025mol/lPH7.5的磷酸缓冲液加入试管中,在40℃保温10min,迅速加入1ml酶液,保温15min后加入3ml10%的三氯乙酸中止反应。取滤液1ml加入0.55M的碳酸钠溶液5ml和福林试剂0.5ml,40℃水浴10min显色,在OD680处比色。